การกลายพันธุ์ วิธีการคัดกรองการกลายพันธุ์ หากไม่ทราบลักษณะของการกลายพันธุ์ และภาพทางคลินิกของโรคบ่งชี้ว่ายีนใด ที่อาจเกิดการกลายพันธุ์ได้ จากนั้นในการวินิจฉัยในห้องปฏิบัติการ วิธีการตรวจคัดกรองการกลายพันธุ์ต่อไปนี้ใช้ในสถิต การวิเคราะห์การจัดเรียงใหม่โดยการซับดีเอ็นเอ การวิเคราะห์ความหลากหลายของโครงสร้างของดีเอ็นเอสายเดี่ยว อิเล็กโตรโฟรีซิส DNA แบบ 2 เกลียวในเกรเดียนต์ของสารลดทอนสภาพ การวิเคราะห์เฮเทอโรดูเพล็กซ์

การเปลี่ยนสภาพโครมาโตกราฟีของเหลวที่มีประสิทธิภาพสูง การตรวจหาสารเคมีของนิวคลีโอไทด์ ที่ไม่มีการจับคู่ 7 การป้องกัน RNase ความไวของวิธีการคัดกรองเพื่อตรวจหาการกลายพันธุ์ยังไม่สมบูรณ์ อย่างไรก็ตาม อัตราส่วนระหว่างเนื้อหาข้อมูล และค่าใช้จ่ายค่อนข้างสูง ดังนั้น จึงใช้ในทางปฏิบัติกันอย่างแพร่หลาย ในขณะเดียวกัน พลังลบของพวกมันก็มีน้อย กล่าวคือหากไม่พบการเปลี่ยนแปลง ไม่ได้หมายความว่าไม่มีการเปลี่ยนแปลง

ลักษณะเฉพาะของวิธีการตรวจคัดกรอง การกลายพันธุ์บางอย่างจะได้รับด้านล่าง SSCP รูปทรงหลายเหลี่ยมแบบเกลียวเดี่ยว วิธีการวิเคราะห์พหุสัณฐานของโครงสร้างของ DNA สายเดี่ยว ขึ้นอยู่กับบันทึกความแตกต่างในการเคลื่อนย้ายอิเล็กโตรโฟเรติกของ DNA สายเดี่ยวซึ่งมีขนาดเท่ากัน แต่แตกต่างกันเนื่องจากการแทนที่นิวคลีโอไทด์ ในการจัดระเบียบเชิงพื้นที่ของโมเลกุล โครงสร้างของ DNA สายเดี่ยวขนาดเล็กขึ้นอยู่กับลำดับนิวคลีโอไทด์

ดังนั้นการแทนที่แม้แต่นิวคลีโอไทด์ แม้แต่ตัวเดียวก็นำไปสู่การเปลี่ยนแปลงในโครงสร้างเชิงพื้นที่ วิธีการนี้รวมถึงการขยายชิ้นส่วน DNA ที่มีขนาดสูงสุด 300 bp การทำให้ผลิตภัณฑ์ PCR เสื่อมสภาพ และอิเล็กโตรโฟรีซิสเจลโพลีอะคริลาไมด์ความละเอียดสูง วิธีการเชิงโครงสร้างสำหรับการตรวจจับ การกลายพันธุ์ของจุดนั้นแพร่หลาย เนื่องจากความเรียบง่ายและความสามารถ ในการตรวจจับการแทนที่ประเภทใดก็ได้ ข้อจำกัดคือขนาดของชิ้นส่วน DNA ที่ศึกษา

เนื่องจากประสิทธิภาพการตรวจจับการกลายพันธุ์ที่สูงถึง 80 ถึง 90 เปอร์เซ็นต์จะแสดงสำหรับชิ้นส่วนที่มีขนาดน้อยกว่า 200 bp และชิ้นส่วนมากกว่า 400 bp ความน่าจะเป็นในการตรวจจับ การกลายพันธุ์ลดลงเหลือ 50 เปอร์เซ็นต์ ปัจจุบันความละเอียดของวิธีการเพิ่มขึ้นอย่างมาก โดยเฉพาะอย่างยิ่งมีการพัฒนาแนวทาง ในการระบุการกลายพันธุ์ของจุดโดยการวิเคราะห์ SSCP ในชิ้นส่วนดีเอ็นเอที่ขยายขนาดได้ถึง 800 bp ด้วยเหตุนี้จึงใช้เจลโพลีอะคริลาไมด์ที่มีค่า pH ต่ำ

HA การวิเคราะห์เฮเทอโรดูเพล็กซ์ การวิเคราะห์เฮเทอโรดูเพล็กซ์ช่วยให้สามารถตรวจจับ การกลายพันธุ์ ที่อยู่ในสถานะเฮเทอโรไซกัสได้ เช่นเดียวกับการแทรกและการลบ หลักการของวิธีนี้มีดังนี้ ในระหว่างการขยายชิ้นส่วนของยีน เฮเทอโรไซกัส การเปลี่ยนสภาพที่ตามมาและการเปลี่ยนสภาพอย่างช้าๆของ PCR ที่ได้รับในส่วนผสมของการขยายเสียง พร้อมกับโฮโมดูเพล็กซ์ 2 ประเภท เฮเทอโรดูเพล็กซ์จะเกิดขึ้นระหว่างสาย DNA ปกติและกลายพันธุ์

โมเลกุลเฮเทอโรดูเพล็กซ์ดังกล่าวแตกต่างกัน ในการเคลื่อนย้ายอิเล็กโตรโฟเรติกจากโฮโมดูเพล็กซ์ เนื่องจากลักษณะโครงสร้างที่ตำแหน่ง ที่ไม่ตรงกันของนิวคลีโอไทด์ เนื่องจากการเคลื่อนที่อิเล็กโตรโฟเรติกของเฮเทอโรดูเพล็กซ์นั้น ต่ำกว่าโฮโมดูเพล็กซ์มาก ความแตกต่างเหล่านี้ตรวจพบ โดยอิเล็กโตรโฟรีซิสในเจลพอลิอะคริลาไมด์ทั่วไป วิธีการคัดกรองการกลายพันธุ์ที่พบมากที่สุด คือการผสมผสานระหว่างการวิเคราะห์เฮเทอโรดูเพล็กซ์และวิธี

ความหลากหลายเชิงโครงสร้างแบบเส้นเดียว ซึ่งทำให้สามารถตรวจจับการกลายพันธุ์แบบจุดได้ในกรณีเกือบ 100 เปอร์เซ็นต์และไม่ต้องใช้เวลามาก DGGE เจลอิเล็กโทรโฟเรซิสไล่โทนสีอิเล็กโตรโฟ รีซิสไล่ระดับการเสื่อมสภาพ เพล็กซ์ของ DNA ได้รับการโยกย้ายแบบเจล ด้วยการไล่ระดับของสภาวะการทำให้เสียสภาพ สามารถใช้การไล่ระดับอุณหภูมิได้ ช่วงเวลาการแผ่รังสีจะดำเนินต่อไปจนกระทั่งดูเพล็กซ์ของ DNA ถึงจุดหลอมเหลวในเจลและแยกจากกัน

หลังจากนั้นการอพยพของชิ้นส่วนจะหยุดลง ความแตกต่างของนิวคลีโอไทด์เดี่ยวใน DNA ปกติและ DNA ทดสอบถูกเปิดเผยโดยการเคลื่อนที่อิเล็กโตรโฟเรติกที่แตกต่างกันในเจล ความไวสูงของวิธีการ 95 เปอร์เซ็นต์ เกิดขึ้นได้เนื่องจากไพรเมอร์จำเพาะกับที่เรียกว่า GC-แคลมป์ ซึ่งแสดงโดยการสลับกันของกวานีน และไซโตซีนภายใน 20 นิวคลีโอไทด์ ส่งผลให้อุณหภูมิหลอมเหลวของผลิตภัณฑ์ ขยายสัญญาณเพิ่มขึ้นอย่างมาก

ซึ่งจะช่วยเพิ่มประสิทธิภาพ ในการตรวจจับการกลายพันธุ์ อย่างไรก็ตามไพรเมอร์ GC-แคลมป์ค่อนข้างแพง ดังนั้นวิธีการนี้จึงมีจำกัด CCM ความแตกแยกทางเคมีของความไม่ตรงกัน เป็นวิธีการแยกทางเคมีของเบสที่ไม่มีการจับคู่ วิธีการนี้ขึ้นอยู่กับการผสมระหว่างโพรบ DNA ที่ติดฉลากกัมมันตภาพรังสีกับ DNA ที่ทดสอบ ไซต์ข้อผิดพลาดจะถูกระบุโดยชุดของปฏิกิริยาเคมี การดัดแปลงโดยใช้ออสเมียมเตตระคลอไรด์ที่เกิดขึ้นกับ DNA สายเดี่ยวที่ไซต์ที่ไม่ตรงกัน

วิธีนี้สามารถใช้ทดสอบชิ้นส่วน DNA ที่มีขนาดได้ถึง 1000 bp โดยจะแสดงตำแหน่งของข้อผิดพลาดและเป็นไปตามแต่อ่อนไหว อย่างไรก็ตาม วิธีการนี้ไม่พบการกระจายอย่างกว้างขวาง เนื่องจากความเป็นพิษของสารเคมี และความซับซ้อนของวิธีการ ความแตกแยกของนิวคลีโอไทด์ ที่ไม่ได้จับคู่ดังกล่าวยังสามารถเป็นเอนไซม์ ซึ่งช่วยขจัดการใช้สารเคมีที่เป็นพิษ วิธีการนี้มีพื้นฐานอยู่บนความแตกแยกของเบส ที่ไม่ตรงกันในเฮเทอโรดูเพล็กซ์ที่เกิดขึ้นระหว่าง DNA

ซึ่งถูกทดสอบและลำดับปกติโดยเอนไซม์ เช่น T4 การแก้ไขหรือเอ็นโดนิวคลีเอส-7 อย่างไรก็ตาม วิธีนี้ไม่แน่นอนมากกว่า CCM ขั้นตอนสุดท้ายในการวิเคราะห์การกลายพันธุ์คือการจัดลำดับ เช่น การกำหนดลำดับนิวคลีโอไทด์ของชิ้นส่วน DNA ที่แสดงการเคลื่อนที่ ของอิเล็กโทรโฟเรติกที่ผิดปกติ ลำดับนิวคลีโอไทด์ของชิ้นส่วนนี้ถูกเปรียบเทียบกับบรรทัดฐาน ซึ่งเป็นผลมาจากการที่พยาธิวิทยาได้รับลักษณะสุดท้าย

บทความอื่นๆที่น่าสนใจ : น้องหมา ข้อพิสูจน์ว่าสุนัขทำให้ชีวิตเราดีขึ้น และอุปกรณ์ที่เหมาะสมสำหรับสุนัข